高效GFPuv荧光筛选基因编辑载体的改造及其在马铃薯遗传转化中的应用
文献类型: 中文期刊
作者: 杜静雅;陈凯园;普金;周会英;祝光涛;张春芝;杜慧
作者机构:
关键词: 马铃薯;GFPuv;基因组编辑;毛状根;遗传转化
期刊名称:中国农业科学
ISSN: 0578-1752
年卷期: 2023 年 56 卷 11 期
页码:
收录情况: 北大核心(2020版) ; ; CSCD(2023-2024年度) ; ; 科技核心(2023版) ; ; 农林核心(2020版)
摘要: 【目的】转基因技术的发展离不开筛选标记的完善与创新,其中的可视化筛选标记在转基因中的应用越来越广泛。近年来,经过突变获得的增强型黄绿荧光蛋白(an enhanced Yellow Green Fluorescent like Protein (eYGFP) under ultraviolet (UV),eYGFPuv(GFPuv))在365 nm紫外光线下能够发出强烈且稳定的绿色荧光,便于观察。构建GFPuv荧光筛选的基因编辑载体,并在马铃薯遗传转化中进行应用验证,为GFPuv荧光筛选在马铃薯转化中广泛应用提供技术支持,同时为后期利用基因组编辑技术创制马铃薯雄性不育系奠定基础。【方法】利用同源重组技术将GFPuv表达框架和基因编辑元件Cas9_sgRNA依次与pCAMBIA2300载体连接,并进行农杆菌介导的烟草瞬时转化试验;通过发根农杆菌Ar qual和MSU440转化马铃薯茎段,在便携紫外灯下观察,并统计荧光根;利用改造载体构建了6个马铃薯花药发育保守基因的编辑载体,通过发根农杆菌体系转化2种马铃薯材料,验证转化效率和编辑效率;利用改造载体对马铃薯进行遗传转化。【结果】成功构建了GFPuv荧光筛选的基因编辑载体pCAMBIA2300MGFPuv-sgRNACas,瞬时转化烟草证实GFPuv表达框架能正常表达;2种发根农杆菌的转化均筛选到绿色荧光的毛状根,加入卡那霉素(kanamycin,Kan)显著提高阳性荧光根的比例,2种菌的转化效率差异不大,但MSU440的发根形成速度更快;6个马铃薯花药发育保守基因的编辑载体在2种马铃薯材料中的转化效率和编辑效率是一致的,但不同靶位点的编辑效率差异较大;改造载体遗传转化马铃薯证实GFPuv荧光可用于马铃薯愈伤组织和再生苗的筛选。【结论】发根农杆菌遗传转化体系是基因编辑效率验证的重要途径,GFPuv荧光可用于马铃薯转化的筛选。
分类号:
- 相关文献
[1]马铃薯Desiree遗传转化体系的优化及转基因植株的获得. 辛翠花,郭江波,黄三文,屈冬玉. 2011
[2]烟草液泡转化酶抑制子基因调控马铃薯块茎低温还原糖累积的研究. 成善汉,宋波涛,谢从华,李竟才,柳俊. 2007
[3]马铃薯蛋白激酶基因StPki的遗传转化及表达分析. 杨煜,郭晓,郭宝太,杨晓慧,单伟伟,金黎平,马伟清,李广存. 2014
[4]一种马铃薯高效无标记转基因技术的建立. 白云凤,张维锋,白冬梅,王国英,王茅雁. 2007
[5]加工型马铃薯品种Shepody农杆菌介导的转化体系研究. 辛翠花,黄三文,郭江波,刘杰,冷小云,屈冬玉. 2011
[6]The Study on the Transformation and Selection of Insect-resistant Cotton Harboring Double-gene. 李付广,郭三堆,刘传亮,李风莲,崔洪志,周勇,李秀兰. 1999
[7]芥菜型油菜BjuB.KAN4基因调控类黄酮的途径. 高国应,伍小方,黄伟,周定港,张大为,周美亮,张凯旋,严明理. 2020
[8]毛状根发展现状研究. 刘莉莉,李昌禹. 2014
[9]发根农杆菌诱导大豆毛状根体系的建立. 张东升,黄文坤,彭焕,彭德良. 2012
[10]三裂叶葛毛状根的诱导及葛根素的产生. 刘士平,沙爱华,薛艳红,李金泉,宋志红. 2006
[11]植物毛状根的诱导及应用. 王成龙,周美亮,邵继荣,吴燕民. 2015
[12]FtMYB1转录因子调控苦荞毛状根黄酮醇合成的机理研究. 伍小方,高国应,左倩,赵辉,张凯旋,严明理,周美亮. 2020
[13]苦荞FtFLS1基因的功能和遗传多样性分析. 欧阳屹南,刘洋,彭佳师,陈媛媛,赵辉,贺玉婷,赵星宇,周美亮,唐新科. 2023
[14]CRISPR/Cas9基因组编辑技术及其在草类植物中的应用. 王丹,周美亮,李金博,孙占敏,吴燕民. 2017
[15]基因组编辑技术应用于作物遗传改良的进展与挑战. 王福军,赵开军. 2018
[16]基因工程作物的安全评估与监管:历史回顾与改革思考. 贾士荣. 2018
[17]产油微藻基因组编辑技术研究进展. 郝夏晖,黄凤洪,龚阳敏. 2019
[18]基因组编辑技术及其安全评价管理. 焦悦,吴刚,黄耀辉,熊鹂,翟勇. 2018
[19]家蚕BmRpt4基因在翅膀发育中的功能研究. 孙霞,张静,印锦,秦笙,张国政,李木旺. 2019
[20]基因组编辑猪的研究现状及展望. 吴添文,齐传翔,李训碧,卢垚,李奎. 2017
作者其他论文 更多>>
-
马铃薯不同生育期耐盐性鉴定
作者:谭薇;刘金涛;吕春桃;王倩;张钟;祝光涛
关键词:盐胁迫;马铃薯;生育期;生理指标
-
用种子种植马铃薯成为可能
作者:张春芝;黄三文
关键词:
-
多倍化和驯化研究进展与展望
作者:杨学勇;苏汉东;张梦卓;祝光涛;程时锋;韩方普;黄三文
关键词:多倍化; 驯化; 育种; 改良; 人工选择
-
多倍化和驯化研究进展与展望
作者:杨学勇;苏汉东;张梦卓;祝光涛;程时锋;韩方普;黄三文
关键词:多倍化; 驯化; 育种; 改良; 人工选择
-
番茄育种重建果实代谢组
作者:祝光涛; 王守创; Zejun Huang; Shuaibin Zhang; Qinggang Liao; Chunzhi Zhang; Tao Lin; Mao Qin; Meng Peng; Chenkun Yang; Xue Cao; Xu Han; Xiaoxuan Wang; Esther van der Knaap; Zhonghua Zhang; Xia Cui; Harry Klee; Alisdair R.Fernie; 罗杰; 黄三文
关键词:
-
马铃薯短花药基因sa1的定位与候选基因预测
作者:王培;唐蝶;李玉梅;杨中敏;祝光涛;黄三文;张春芝
关键词:马铃薯;花药发育;BSA-seq
-
马铃薯红色薯肉调控基因的精细定位与候选基因分析
作者:许芸梅;李玉梅;贾玉鑫;张春芝;李灿辉;黄三文;祝光涛
关键词:红色薯肉;花青素代谢;BSA-seq;精细定位;候选基因