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犬种布鲁氏菌BP26蛋白单链抗体的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 孙鹏翔;尹伊;杨新梅;刘津月;鲍衍清;张广冻;祁晶晶;刘冠慧;田明星;王少辉

作者机构：

关键词： 布鲁氏菌;BP26蛋白;单克隆抗体;单链抗体

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 犬布鲁氏菌病是一种主要由犬种布鲁氏菌感染引起的重要人畜共患病，其精准诊断是控制该病的重要策略之一。BP26蛋白是布鲁氏菌的一种主要免疫原性蛋白，其作为靶标在开发布鲁氏菌诊断试剂中具有重要价值。本研究首先通过PCR方法将bp26基因克隆至表达载体pCold I中，转化至大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达并纯化BP26蛋白。随后，将该蛋白免疫接种BALB /c雌性小鼠，采用传统杂交瘤技术制备抗BP26蛋白单克隆抗体，并通过免疫印迹实验验证其反应原性。之后，提取杂交瘤细胞株总RNA，反转录为cDNA，通过PCR方法获得抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片段，进而通过重叠PCR构建成VL-linker-VH结构的单链抗体基因（scFv），将其克隆至表达载体pCold TF，转化至大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达纯化，获得TF-scFv单链抗体。最后，通过免疫印迹实验和ELISA实验分析TF-scFv与单克隆抗体竞争结合BP26蛋白的反应。本研究制备的BP26单克隆抗体和scFv抗体为开发犬布鲁氏菌病诊断试剂奠定基础。

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