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双抗体夹心酶联免疫吸附法检测小麦中禾谷镰孢菌

文献类型： 中文期刊

作者： 张浩然;程传民;王晨;李培武;张奇;唐晓倩

作者机构：

关键词： 禾谷镰孢菌;单克隆抗体;免疫测定;小麦;霉菌毒素

期刊名称：食品安全质量检测学报

ISSN： 2095-0381

年卷期： 2025 年 16 卷 11 期

页码：

收录情况： 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 目的 研制禾谷镰孢菌的特异性抗体,开发小麦禾谷镰孢菌污染情况的双抗体夹心酶联免疫吸附测定法（double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay, DAS-ELISA）。方法 采用物理研磨法制备禾谷镰孢菌真菌裂解液抗原,通过杂交瘤技术研制禾谷镰孢菌单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb）,对mAb的特异性、亲和力等抗体性能参数进行测定。采用棋盘法探究制备的mAb与多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）最佳组合条件,进而建立DAS-ELISA方法。对方法的灵敏度、重复性进行评价,并应用于自然发病小麦样品的检测。结果 成功制备了禾谷镰孢菌mAb 1C4F3和pAb FG2801。mAb与其他真菌无交叉反应,特异性强。亲和力常数为1.26×10～7 L/mol,具有较高的亲和力。建立了禾谷镰孢菌DAS-ELISA方法,检出限达1.223μg/mg,标准曲线范围1.56～100.00μg/mg。通过对从中国主要小麦产区采集的96份自然发病样本进行检测,验证了该方法的可靠性。发现样品中禾谷镰孢菌的含量与脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol, DON）的含量存在显著的正相关关系（r2=0.8897）,因此DAS-ELISA不仅可用于禾谷镰孢菌的快速检测,还可评估样本中DON的污染情况。结论 本研究开发的DAS-ELISA能够对小麦中的禾谷镰孢菌进行快速定量测定,同时可快速评估样本中DON的污染水平,具有较高的准确性和可靠性,在田间及收获后小麦作物禾谷镰孢菌污染监测方面具有良好的应用潜力。

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