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非洲猪瘟病毒CP312R基因编码蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备与应用

文献类型： 中文期刊

作者： 刘佳晨;郭子强;陈金霞;曹云雷;童武;乔思娜;刘长龙;赵冉;郑海红;童光志;李丽薇;高飞

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;CP312R基因;原核表达;多克隆抗体

期刊名称：中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2024 年 1 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为制备ASFV CP312R 基因编码蛋白的多克隆抗体,利用PCR方法从非洲猪瘟病毒(African swine fever vi-rus,ASFV)的灭活样品中扩增出924 bp的CP312R基因全长序列,利用同源重组法构建出原核表达质粒pCold-Ⅰ-ASFV-CP312R,将其转化至原核表达感受态细胞BL21中,经1 mmol/L的IPTG低温条件下诱导表达CP312R编码蛋白并经过镍柱亲和层析纯化后,利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析,表达蛋白的相对分子质量约为34 kDa,通过 Western blot分析,该蛋白能被ASFV抗体特异性识别.将所得的蛋白经处理纯化后免疫小鼠3次,得到含多克隆抗体的血清.利用该抗体检测实验室构建并拯救的表达ASFV CP312R基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),结果显示该多抗具有良好的反应原性和特异性,并且证明了 ASFV CP312R基因编码蛋白可在PRRSV活载体中稳定表达.

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