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牛G3BP1的原核表达及其对bcGAS生物酶催化活性的影响

文献类型： 中文期刊

作者： 田慧慧;何小兵;陈国华;高真贞;韦雨松;俞宗佑;房永祥;米晓云;景志忠

作者机构：

关键词： 牛cGAS;牛G3BP1;原核表达;第二信使分子;酶促反应

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2023 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为了探究免疫调节分子G3BP1对DNA识别受体cGAS生物酶催化活性的影响，通过提取牛血液淋巴细胞中总的RNA，经RT-PCR反转录成cDNA，克隆出bG3BP1的基因全长；随后构建bG3BP1的pET-28a-SUMO-bG3BP1原核表达载体，将其转化至大肠杆菌中进行诱导表达，使用镍亲和层析柱对重组蛋白bG3BP1进行纯化，并切除His6-SUMO标签后再经镍柱纯化；最后将获得的bG3BP1蛋白用于bcGAS的体外酶促反应，采用ELISA方法检测酶促合成产率。结果显示，可溶性表达的bG3BP1蛋白促进了bcGAS的体外酶促反应，提高了第二信使分子2′ 3′-cGAMP的产率，这为2′ 3′-cGAMP的大规模生产及应用提供了研究思路和技术方法。

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