基于沙门菌转录因子RipR的衣康酸检测方法建立
文献类型: 中文期刊
作者: 范修齐;王志豪;孔兰芳;鲁壮壮;蒋蔚;陈兆国;韩先干
作者机构:
关键词: 衣康酸;沙门菌RipR;荧光报告基因;检测方法
期刊名称:中国动物传染病学报
ISSN: 1674-6422
年卷期: 2023 年
页码:
收录情况: 北大核心(2020版) ; ; 科技核心(2023版) ; ; 农林核心(2020版)
摘要: 衣康酸是由巨噬细胞通过炎症刺激促使顺乌头酸脱羧酶生成,衣康酸具有免疫调节、抗氧化、抗炎和杀菌作用,开展衣康酸检测方法研究,是研究其调控作用的关键沙门菌转录因子RipR(STM3121基因编码)可通过结合STM3121启动子抑制其转录活性,而RipR与衣康酸结合后可解除其抑制作用。基于此调控方式,可将表达绿色荧光蛋白的报告基因AmCyan、STM3121及其启动子三个元件串联后构建衣康酸检测质粒,通过检测AmCyan的转录活性,可实现对衣康酸的定性检测。因此,本研究首先通过重叠PCR技术,将AmCyan、STM3121及其启动子序列克隆至pACYC184质粒中,成功构建衣康酸检测质粒pACYC184-STM3121-AmCyan。其次,为了评价该质粒对衣康酸的检测作用,将其转化DH5α,成功获得DH5α-pACYC184-STM3121-AmCyan衣康酸检测模型菌株。最后,向该模型菌株分别添加外源和内源性(大肠杆菌感染RAW264.7巨噬细胞后的细胞裂解液)2种方式产生的衣康酸,验证该质粒对衣康酸的检测作用,结果表明,二者均可成功诱导DH5α-pACYC184-STM3121-AmCyan模型菌株产生绿色荧光,而对照组不产生。本研究成功建立衣康酸检测方法,为后续开展衣康酸生物学功能研究提供技术支撑。
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