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A群轮状病毒和塞内卡病毒双重RT-qPCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 刘星;罗霆宇;张玉;李凯丽;尹博曌;李昌文;夏长友;高彩霞

作者机构：

关键词： A群轮状病毒;塞内卡病毒;双重RT-qPCR检测方法建立及应用

期刊名称：实验动物科学

ISSN： 1006-6179

年卷期： 2025 年 42 卷 3 期

页码：

收录情况： 科技核心（2024版）

摘要： 目的 建立A群轮状病毒(PoRVA)和塞内卡病毒(SVA)双重RT-qPCR检测方法,并对其进行初步应用。方法 通过比对A群轮状病毒和塞内卡病毒毒株序列,选取PoRVA NSP3基因、SVA VP1基因保守区域分别设计引物和探针,建立PoRVA和SVA双重RT-qPCR检测方法。随后对方法的特异性和敏感性进行检测；取浓度为10~6~10^(3)copies/μL 10倍系列稀释的重组质粒标准品,每个浓度做3个平行,重复检测3次,计算组内和组间变异系数,评估方法的重复性和稳定性；用建立的双重RT-qPCR检测方法与《GB/T34756—2017猪轮状病毒病病毒RT-PCR检测方法》和《SN/T 5486—2022塞内卡病毒病检疫技术规范》的检测方法进行比对,并检测15份猪粪便样品和35份猪肛拭子样品,评估该方法的实际应用性。结果 建立的双重RT-qPCR方法在10~9~10~1 copies/μL范围Ct值与质粒浓度呈线性关系,PoRVA标准曲线Slope为-3.085,r^(2)值为0.993,扩增效率为110.956%,SVA标准曲线Slope为-3.085,r^(2)值为0.993,扩增效率为110.935%,可检测到的PoRVA和SVA最低限均为10~1 copies/μL；且与其他7种实验猪常见病原不发生交叉反应；重复检测10~6~10^(3 )copies/μL质粒标准品,组内变异系数小于0.15%,组间变异系数小于1.50%。用建立的双重RT-qPCR方法与《GB/T34756—2017猪轮状病毒病病毒RT-PCR检测方法》和《SN/T 5486—2022塞内卡病毒病检疫技术规范》方法检测15份猪粪便样品和35份猪肛拭子样品,结果显示,RT-qPCR检测出PoRVA阳性100%(50/50),SVA阳性66%(33/50),《GB/T34756—2017猪轮状病毒病病毒RT-PCR检测方法》检测阳性率100%(50/50),《SN/T 5486—2022塞内卡病毒病检疫技术规范》检测阳性率24%(12/50),阳性符合率达到100%。结论 本研究建立的双重RT-qPCR检测方法可以有效地检测PoRVA和SVA,可为猪群的疫病检测和日常监测提供技术支撑。

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