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TaqMan荧光定量PCR检测滑液囊支原体方法的建立及其感染鸡血液内载量测定

文献类型： 中文期刊

作者： 朱悦;祁晶晶;武梦思;张广冻;丁思羽;陈玥彤;高崧;于圣青

作者机构：

关键词： 滑液囊支原体;TaqMan荧光定量PCR;攻毒模型;增殖变化

期刊名称：微生物学通报

ISSN： 0253-2654

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版）

摘要： 【背景】滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae，MS)是禽类的常见病原，严重危害家禽养殖业的发展。MS易与其他病原混合感染，给临床诊断造成困难，因此亟须建立一种快速、准确、灵敏的检测方法对疑似患病禽进行快速诊断，以降低经济损失。【目的】建立一种检测MS的TaqMan荧光定量PCR方法，测定MS在感染鸡血液内的载量变化，为临床检测MS感染提供技术支持。【方法】参考GenBank中登录的MS基因保守区域序列设计1对特异性引物和探针，以温度梯度qPCR法确定最适退火温度，用矩阵法优化其引物和探针加入量，通过提取MS0801基因组作为模板，构建标准曲线，并进行特异性、灵敏度、重复性试验，建立一种检测MS的TaqMan荧光定量PCR方法。使用建立的方法检测滴鼻攻毒和足垫攻毒后MS在感染鸡血液内的载量变化。【结果】建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法最佳退火温度为55℃，引物和探针(10 mol/L)加入量分别为0.8 mL和0.4 mL；其扩增曲线具有良好的线性关系，R2>0.99；其特异性强，仅对MS有特异性反应，对其他病原均无扩增反应；其敏感性高，最低检测限为25 copies/μL；其重复性好，批间和批内实验变异系数均小于2%。通过TaqMan荧光定量PCR检测MS在感染鸡血液内的动态变化，发现两个攻毒组MS含量的峰值和总体波动无明显差异，但足垫攻毒的MS在血液中的增殖要快于滴鼻攻毒。【结论】建立了一种能够快速检测MS的TaqMan荧光定量PCR方法，并用于检测MS在感染鸡血液内的动态变化，为临床上检测MS感染提供了技术支撑，为疫苗免疫评价方法提供了新的思路。

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