文献类型： 中文期刊
作者： 郑雨婷;张行雨;王诗琪;廖洪艳;王佳玲;张笑莹;刘雪兰;胡青海
作者机构：
关键词： 沙门菌;食源性致病菌;LAMP-CRISPR/Cas12b;检测限;特异性
期刊名称：中国预防兽医学报
ISSN： 1008-0589
年卷期： 2025 年 9 期
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）
摘要： 沙门菌是引起细菌性食物中毒的主要病原菌之一.为了建立一种快速、灵敏、便捷的检测食源性沙门菌的方法,本研究根据沙门菌的肠毒素基因stn序列设计特异性引物,筛选得到用于环介导等温扩增(LAMP)的引物,建立了 LAMP检测方法.根据LAMP扩增片段的DNA序列设计sgRNA,筛选出能特异性识别并激发Cas12b切割的sgRNA.将LAMP与CRISPR/Cas12b结合,经条件优化后建立检测沙门菌的一锅法LAMP-CRISPR/Cas12b方法.利用该方法检测8种常见的食源性致病菌和不同血清型的沙门菌,进行特异性分析;以10倍倍比稀释的食源性沙门菌菌液提取的基因组DNA作为模板进行敏感性评价;利用该方法于不同时间检测提取的菌液DNA,分析该方法的重复性.特异性试验结果显示,建立的一锅法LAMP-CRISPR/Cas12b检测不同血清型的沙门菌均为阳性,而检测8种其他食源性致病菌均为阴性,表明该方法特异性强;敏感性试验结果显示样品未增菌时的检测限可达到4.9×101cfu/mL,比qPCR和常规PCR的敏感性分别高10倍和1 000倍.一锅法LAMP-CRISPR/Cas12b不同时间检测沙门菌基因组DNA,结果显示均为阳性,具有良好的重复性.对采集的20份临床样品利用一锅法LAMP-CRISPR/Cas12b、qPCR和常规PCR检测,结果显示该方法与其他两种方法对沙门菌的阳性符合率分别为100％和87.5％.本研究建立了针对沙门菌的一锅法LAMP-CRISPR/Cas12b检测体系,为快速、精准、可视化地检测该食源性致病菌提供了新的技术手段.
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