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表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组杆状病毒构建与鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 王安铖;李俊波;胡一帆;孟鑫;陈玲超;童武;单同领;于海;孔宁;刘雪兰;童光志;徐家萍;郑浩

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;杆状病毒表达;p72蛋白;抗原性

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2023 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为了制备高活性的非洲猪瘟病毒p72蛋白，本文优化合成了非洲猪瘟B646L和B602L全基因序列，并分别克隆进pFastBac Dual载体中，构建了重组质粒pBac-B602L-B646L。将pBac-B602L-B646L转化感受态细胞DH10Bac中，经过蓝白斑纯化和PCR鉴定，获得重组杆状质粒rBacmid-p72。将rBacmid-p72转染到sf9昆虫细胞中，获得重组杆状病毒。通过IFA和western bolting分析，证实rBac-p72感染sf9表达p72和pB02L。以rBac-p72感染悬浮培养的sf9细胞，并通过Ni柱亲和层析获得了纯化的p72蛋白。以p72蛋白包被酶标板，通过间接ELISA检测，显示纯化的p72蛋白能与ASFV阳性血清中的抗体良好结合。上述研究结果表明，本文通过杆状表达的p72蛋白具有较高的活性，为下一步开展p72蛋白功能及应用研究打下良好的基础。

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