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稳定表达PEDV N蛋白的Vero细胞系和PK1细胞系的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 刘甜;程群;孙琳舒;杨心雨;秦文珍;孔宁;单同领;李有文

作者机构：

关键词： 猪流行性腹泻病毒;核衣壳蛋白;慢病毒;稳转细胞系

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 为深入研究猪流行性腹泻病毒（PEDV）核衣壳（N）蛋白的生物学特性，以及建立反向遗传操作平台，本研究成功构建了稳定表达PEDVN蛋白的非洲绿猴肾细胞（Vero）系和猪肾细胞（PK1）系。本研究将PEDVN基因克隆至慢病毒载体pLVX-EF1a-IRES-Puro，通过同源重组法获得重组质粒pLVX-PEDV-N，利用慢病毒包装系统包装出能够表达PEDVN蛋白的慢病毒颗粒，然后分别感染Vero和 PK1细胞，再通过嘌呤霉素筛选获得稳定表达N蛋白的目的细胞系。以细胞基因组DNA为模板，通过PCR扩增反应，表明PEDV N蛋白的编码序列存在于细胞系基因组中，Western blot和IFA试验表明N蛋白可在细胞系中稳定表达。本研究成功建立了稳定表达PEDV N蛋白的Vero细胞系和PK1细胞系，为PEDV N蛋白生物学特性研究和建立PEDV反向遗传操作平台奠定了基础。

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