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猪流行性腹泻病毒G2c型变异株N蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 祝军;李健楠;刘清艳;祝宇翔;邢燕茹;高硕磊;杨静怡;单同领;童武;郑浩;孔宁;周艳君;童光志;孙英峰;于海

作者机构：

关键词： G2c型猪流行性腹泻病毒;N蛋白;原核表达

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 本研究以猪流行性腹泻病毒（PEDV）G2c型变异株基因组cDNA为模板，通过PCR扩增获得N基因片段，并将其克隆到pCold-I原核表达载体中，构建重组质粒。随后将该重组质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞内。经IPTG诱导表达后，采用镍柱亲和层析法纯化获得带有His标签的高纯度重组N蛋白。以该重组蛋白作为免疫原，经3次免疫BALB/c雌鼠后采集血清，成功制备出鼠源抗PEDV N蛋白多克隆抗体。抗原表位比对分析发现，相较于PEDV G1、G2a及G2b型毒株，G2c型毒株N蛋白抗原表位区存在显著差异，但其在G2c型内部高度保守。通过Western blot及间接免疫荧光试验（IFA）对该多克隆抗体的特异性进行鉴定，结果表明该鼠源抗N蛋白多克隆抗体能够特异性识别PEDV感染的Vero细胞中所表达的N蛋白，且经ELISA测定该多抗血清效价为1:25 600。本研究成功表达并纯化出PEDV G2c型变异株的重组N蛋白，并进一步制备出特异性良好的抗N蛋白多克隆抗体，为深入研究PEDV N蛋白的生物学功能及建立针对当前流行株的特异性检测方法奠定了坚实基础。

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