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柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA表达文库的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 林青;才学鹏;窦永喜;翟军军;闫鸿斌;张彦明;田广孚;景志忠

作者机构：

关键词： 柔嫩艾美耳球虫;孢子化卵囊;子孢子;cDNA表达文库;构建

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2007 年 38 卷 09 期

页码： 999-1002

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 在无RNase污染的环境下,提取柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)子孢子RNA,进而纯化mRNA,采用Oligo(dT)引物反转录合成cDNA第一链和第二链,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用Phage Maker extract对以上连接产物进行体外包装,形成完整的噬菌体,并用该噬菌体转染大肠杆菌ER1647,进行文库容量测定和扩增。以扩增文库的DNA为模板,利用已知基因引物克隆E. tenella3-1E基因,并进行测序。结果表明,成功构建了E. tenella孢子化卵囊子孢子的cDNA文库,文库原始库容量约为4×106pfu/mL,插入片段约100~3000 bp,扩增得到特定的E. tenella3-1E基因,说明文库质量高、代表性强,为进一步从文库中筛选相关基因提供了有效的工具。

分类号： S852.7

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