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弓形虫四个假定蛋白基因缺失株的构建及其基本生物功能学研究

文献类型： 中文期刊

作者： 王沛;王萌;李婷婷;郑晓楠;梁勤立;陈小庆

作者机构：

关键词： 弓形虫;微线体蛋白;CRISPR/Cas9;基因敲除

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2022 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）

摘要： 旨在探究4个与MIC相关的假定蛋白在弓形虫速殖子阶段的作用及基因缺失对毒力的影响。在线设计TGME49＿222975、TGME49＿275798、TGME49＿238220和TGME49＿238210的sgRNA序列，用PCR将pSAG1::CAS9-U6::sgUPRT模板上的sgUPRT突变为相应的sgRNA，获得目的基因的CRISPR质粒。将获得的目的基因质粒和DHFR片段混合后电转入弓形虫速殖子，经乙胺嘧啶单克隆筛选后，PCR鉴定成功即得目的基因缺失株。再用目的基因缺失株和RH野生株进行复制、逸出、噬斑和小鼠毒力试验，比较二者各项试验结果以评定目的基因对于弓形虫速殖子功能和毒力的影响。结果显示：目的基因缺失株和野生株RH在相同时间内形成的含有1、2、4、8、16个速殖子的纳虫空泡数目占比差异不大（P>0.05），纳虫空泡内速殖子在钙离子刺激下2 min内均可全部逸出，相同条件和时间培养形成的噬斑大小和面积差异不大（P>0.05），接种相同数目速殖子的小鼠自开始死亡到全部死亡时间差别不大（P>0.05）。本研究成功构建了4个弓形虫MIC相关基因的缺失株（RHΔTGME49＿222975、RHΔTGME49＿275798、RHΔTGME49＿238200和RHΔTGME49＿238210），但毒力与野生株毒力均差异不大，说明这四个基因均不是弓形虫的重要“独立”毒力因子，但可能在其他方面发挥着重要的生物学功能。本研究初步解析了4个弓形虫MIC相关蛋白的基本生物学功能，为后期全面解析弓形虫蛋白功能提供数据。

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