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基于RT-RPA-LFD等温扩增的西瓜银斑驳病毒快速检测技术的建立及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 李文扬;修筠清;徐志红;王敏;古勤生;康保珊;刘莉铭;赵胜杰;玉山江·麦麦提;吴会杰

作者机构：

关键词： 西瓜;西瓜银斑驳病毒;RT-RPA-LFD;可视化检测

期刊名称：园艺学报

ISSN： 0513-353X

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 建立了一种基于逆转录酶重组酶聚合酶扩增（reversetranscriptaserecombinasepolymerase amplification,RT-RPA）结合侧向流层析（lateral flow dipstick,LFD）试纸条技术的西瓜银斑驳病毒（watermelon silvermottlevirus,WSMoV）快速检测方法。针对WSMoV的L基因保守序列设计特异性引物和探针，通过优化反应体系和条件，确定RT-RPA-LFD最佳引物浓度为0.1μmol·L-1、探针浓度为0.06μmol·L-1、反应温度为37℃和时间12 min。该方法对WSMoV具有高度特异性，与黄瓜绿斑驳花叶病毒（cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）、小西葫芦黄花叶病毒（zucchini yellow mosaic virus,ZYMV）、新德里番茄曲叶病毒（tomato leaf curl new delhi virus,ToLCNDV）、西瓜花叶病毒（watermelon mosaic virus,WMV）、黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus,CMV）和甜瓜黄斑病毒（melon yellow spot virus,MYSV）等常见西甜瓜病毒无交叉反应；灵敏度与RT-PCR一致，最低检测限达总RNA的10-4稀释度。对田间32份西甜瓜样品进行检测验证，RT-RPA-LFD与RT-PCR均检出14份阳性，结果一致。本研究建立的RT-RPA-LFD方法反应温度恒定，扩增时间约12min，结合侧向层析检测，整个过程在20min内完成，较传统RT-PCR（约2～3 h）更为简便快捷，且检测结果能实现可视化，可用于WSMo V的田间现场快速检测。

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