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表达ASFV pB602L JEV复制子的构建及鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 程星雨;肖长广;周群;李宗杰;邵东华;刘珂;李蓓蓓;魏建超;马志永;邱亚峰

作者机构：

关键词： JEV复制子;非洲猪瘟病毒;B602L;复制缺陷病毒

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 鉴于RNA病毒复制子可实现外源抗原基因的高水平表达，本研究选取非洲猪瘟病毒（ASFV）B602L基因，尝试构建表达ASFV pB602L的日本乙型脑炎病毒（JEV）复制子，通过复制子瞬时转染及构建复制缺陷病毒验证复制子的表达情况。首先，对ASFV B602L基因进行密码子优化，将优化后的B602L基因克隆入JEV复制子（pJEV-CMV-EGFP）中，获得复制子pJEV-CMV-pB602L。随后，将pJEV-CMV-pB602L转染HEK-293T细胞，利用间接免疫荧光和Western blot分析pB602L及JEV非结构蛋白的表达，结果显示pJEV-CMV-pB602L在细胞中能够表达B602L基因，同时JEV复制子骨架中的非结构蛋白NS1也能得到表达。进一步，为了利用该复制子构建表达pB602L的JEV复制缺陷病毒，将pJEV-CMV-pB602L与表达JEV结构蛋白的质粒pCAGGS-CprME共转染BHK-21细胞，用于构建表达pB602L的JEV复制缺陷病毒（rJEV△C/prM/E-pB602L），利用间接免疫荧光和Western blot鉴定缺陷病毒的构建情况，结果显示成功构建出表达pB602L的缺陷病毒。总之，本研究成功构建出表达ASFV pB602L的JEV复制子，瞬时转染及重组缺陷病毒感染都显示该复制子可以有效地表达ASFV pB602L蛋白。这些结果为后续构建表达其它ASFV抗原的JEV复制缺陷病毒奠定基础。

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