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猪萨佩罗病毒VP1蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 孔祥雨;曹丽艳;索学鹏;王娅婷;张宇;段月月;袁聪;施磊;郑海学;王琦

作者机构：

关键词： 猪萨佩罗病毒;VP1蛋白;原核表达;多克隆抗体

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2023 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为了检测猪萨佩罗病毒（porcine sapelovirus，PSV），本研究制备了PSV衣壳蛋白VP1的多克隆抗体。参照本团队分离毒株（PSV GS01）序列，将VP1基因与原核表达载体pET-32a（+）连接，构建pET-32a-VP1重组质粒，将其转入大肠杆菌BL21（DE3）中，经IPTG诱导表达，获得重组蛋白，利用Ni-NTA亲和层析柱纯化VP1蛋白。用纯化后的VP1蛋白免疫BALB/c小鼠及新西兰大白兔，获得多克隆抗体，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹试验（Western-blot）及免疫荧光试验（IFA）验证其反应性。ELISA结果显示，获得的多克隆抗体的效价均高于1∶1 638 400；Western-blot及IFA结果显示，该多克隆抗体能特异性识别PSV 感染表达的VP1蛋白，说明该重组蛋白具有良好的反应性。本研究成功表达了PSV VP1蛋白，并制备了小鼠和家兔多克隆抗体，这为后期建立PSV诊断方法及致病机制的研究奠定了基础。

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