文献类型： 中文期刊
作者： 龚青;王相伟;殷相平;张杰;毛箬青;孙跃峰
作者机构：
关键词： 非天然氨基酸; 正交系统; 正交氨酰tRNA合成酶/tRNA; 报告基因
期刊名称：中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2022 年
页码：
收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）
摘要： 复制缺陷型病毒不能在宿主体内复制，用其制备的疫苗不仅能够诱导宿主体液免疫和细胞免疫应答，还具有较好的安全性。本研究构建了一种利用琥珀正交系统制备复制缺陷型病毒的新平台。首先构建携带琥珀终止密码子（TAG）和EGFP报告基因的质粒（pTAG-EGFP），然后以pAcBac1.tR4-MbPyl质粒为模板，利用PCR方法扩增正交氨酰tRNA合成酶/tRNA片段（aaRS/tRNA）并克隆至不同载体中，成功构建了真核表达质粒paaRS/tRNA。将不同组合的质粒paaRS/tRNA和pTAG-EGFP共转染BHK-21细胞，荧光检测表明氨酰tRNA合成酶及tRNA在BHK-21细胞中具有正交性和高度特异性；经G418和嘌呤霉素筛选及Western-blot验证，本研究成功构建了一种稳定表达氨酰tRNA合成酶及tRNA的BHK-21细胞系，为后续拯救TAG突变复制缺陷型病毒提供了强有力的技术平台，也为重大动物疫病复制缺陷型病毒活疫苗研究奠定了基础。
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