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猪细小病毒6型ORF2基因的截短表达及多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 欧云文;潘琴;汪洋;代军飞;任绍科;张洋;张杰

作者机构：

关键词： 猪细小病毒6型（PPV6）;ORF2基因;截短表达;多克隆抗体

期刊名称：中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2023 年 06 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 【目的】原核截短表达猪细小病毒6型（Porcine parvovirus type 6,PPV6）ORF2基因,并制备PPV6 VP1（348 aa-675 aa）蛋白多克隆抗体,为后续研究该蛋白的生物学功能提供材料。【方法】以PPV6分离毒株基因组为模板,PCR扩增获得ORF2截短基因片段,将其克隆至原核表达载体pET30a（+）中构建重组质粒pET30a-PPV6-ORF2。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂亲和层析纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化后重组蛋白。将纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂混匀乳化,免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,采用Western blotting、间接免疫荧光试验（IFA）和间接ELISA鉴定免疫兔血清特异性。【结果】成功构建了pET30a-PPV6-ORF2重组表达载体,原核截短表达了PPV6 VP1（348 aa-675 aa）蛋白;SDS-PAGE结果显示,重组PPV6 VP1（348 aa-675 aa）蛋白大小约为40 ku,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果显示,该蛋白可与PPV6阳性猪血清发生特异性结合,具有良好的反应原性;Western blotting间接与ELISA结果显示,纯化后免疫兔血清与PPV6全病毒蛋白发生特异性反应,抗体效价为1∶25 600;IFA鉴定结果表明,PPV6 VP1（348 aa-675 aa）蛋白兔源多克隆抗体具有良好的特异性。【结论】本研究成功原核截短表达了PPV6 ORF2基因并制备了兔抗PPV6 VP1（348 aa-675 aa）蛋白多克隆抗体,为PPV6血清学检测方法的建立和PPV6 VP1蛋白的进一步研究提供了参考。

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