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猫源TMED10蛋白过表达稳转细胞株的构建及其应用

文献类型： 中文期刊

作者： 孙亚娟;袁莉刚;张达;汤傲星;刘光清;朱杰

作者机构：

关键词： 猫源TMED10;慢病毒包装;过表达细胞系;猫传染性腹膜炎病毒

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 旨在建立猫源TMED10蛋白过表达稳转细胞株（CRFK-TMED10），为猫传染性腹膜炎病毒（Feline infectious peritonitis virus -FIPV）体外增殖，研究其感染机制提供重要工具。首先，通过特异性PCR，从猫肠道组织cDNA文库中，获得猫源TMED10基因编码序列，并进行生物信息分析，发现猫源TMED10为双跨膜的亲水性蛋白，具有分泌信号肽，与牛源TMED10亲缘关系最近。其次，利用三质粒慢病毒包装系统构建含猫源TMED10基因的重组慢病毒，感染猫肾上皮细胞（CRFK），并通过杀稻瘟菌素进行加压筛选，随后利用Western bloting、IFA对阳性细胞进行鉴定，最终获得稳定过表达猫源TMED10蛋白的CRFK-TMED10细胞系。此外，研究发现FIPV SH2021毒株在该细胞系中的增殖能力显著提高。本研究为后续探索TMED10促进FIPV增殖的分子机制提供了重要工具。

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