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腐败梭菌α毒素突变体可溶性表达及其对小鼠的免疫评价

文献类型： 中文期刊

作者： 雷伊诺;赵慧玉;幸倩如;许国顺;张广智;张珊;蒋卉;沈青春;丁家波;韦英益;范学政

作者机构：

关键词： 腐败梭菌α毒素;MPEPE;毒力;可溶性;免疫原性

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 本研究旨在获得可溶性、免疫原性好的腐败梭菌α毒素突变体。通过MPEPE预测工具对α毒素蛋白进行点突变预测，构建表达载体在大肠杆菌中表达验证，比较rCsa各突变体的可溶性、毒性和小鼠免疫原性。结果表明，rCsa突变体在大肠杆菌中正确表达，条带大小均为约47 ku。rCsaS398D、rCsaK405M、rCsaN397D在大肠杆菌细胞裂解上清中分别占表达总蛋白的9.5%、9.4%、10.5%，在裂解上清与沉淀中的表达量之比分别为2.5、2.6、2.9，rCsaN397D可溶性表达量最高；小鼠毒性试验结果显示3个rCsa突变体毒性均未丢失；Vero细胞毒性试验显示，0.001 6 μg·mL-1的各rCsa突变体即可引起明显的CPE；ELISA检测rCsa突变体二免21 d后小鼠血清IgG抗体水平，rCsaN397D组血清的S/N值极显著高于rCsaS398D组和rCsaK405M组（P＜0.01）；用Vero细胞测定rCsa突变体二免21 d鼠血清的中和效价，发现rCsaN397D二免21 d鼠血清的中和效价为6400 MLD·mL-1，极显著高于rCsaS398D和rCsaK405M组免疫血清的中和效价（P＜0.0001），且高于前期试验中未突变rCsa二免21 d鼠血清的的中和效价。综上，rCsaN397D在可溶性、免疫原性方面均优于未突变rCsa、rCsaS398D和rCsaK405M，可作为腐败梭菌病基因工程亚单位疫苗的候选抗原。

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