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两个苹果乙烯反应因子MdAP2D4与MdAP2D19的序列分析及原核表达

文献类型： 中文期刊

作者： 田义;陈可钦;安秀红;郝红梅;刘志;丛佩华;郝玉金

作者机构：

关键词： 抑制性消减杂交;茉莉酸甲酯;乙烯反应因子;原核表达;抗病性

期刊名称：中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2013 年 46 卷 17 期

页码： 3635-3642

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】克隆苹果中的两个ERF(ethylene responsive factor)转录因子,对其序列与表达进行分析;并进一步构建原核表达载体,在大肠杆菌中诱导融合蛋白表达,为解析两基因的抗病功能及作用机制奠定基础。【方法】首先,将抑制性消减杂交筛选到的EST序列进行BLAST比对,根据比对获得的MdAP2D4与MdAP2D19的cDNA序列设计引物进行克隆;然后,利用MEGA4.1软件将两个ERF蛋白与拟南芥的AP2家族蛋白进行聚类分析,对保守的AP2功能域的氨基酸序列进行分析;并进一步利用RT-PCR检测两基因对外源MeJA的响应;最后,将两个基因分别连接到原核表达载体PGEX-4T-1上,利用IPTG对转化的大肠杆菌BL21进行诱导。【结果】MdAP2D4与MdAP2D19两个基因均与拟南芥B3组ERF亲缘关系最近,在叶片中表达较高,都能被外源的MeJA诱导表达。SDS-PAGE检测结果表明,两个基因的融合蛋白均能够被IPTG诱导表达。【结论】MdAP2D4与MdAP2D19为B3组ERF转录因子,外源MeJA能够诱导其表达。

分类号： S661.1

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