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鸡毒支原体磷酸甘油酸变位酶的亚细胞定位及免疫原性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 赵宇馨;祁晶晶;尚原冰;李浩然;刘婷;王宇;王少辉;田明星;高崧;于圣青

作者机构：

关键词： 鸡毒支原体;磷酸甘油酸变位酶;原核表达;亚细胞定位;免疫原性

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2023 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 【背景】鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum， MG）感染鸡、鸭、鹅等多种禽类，引起慢性呼吸道疾病，导致产蛋率下降、生长发育受阻，给养禽业造成的经济损失大。磷酸甘油酸变位酶（Phosphoglycerate mutase， PGM）是一种参与糖酵解和葡萄糖异生的重要酶，研究表明PGM在一些病原菌的膜表面分布，并能结合宿主细胞的胞外基质蛋白，在病原菌致病过程中发挥重要作用，而MG中的PGM蛋白（MGPGM）相关方面的研究少见报道。【目的】对MGPGM进行原核表达、亚细胞定位检测及免疫原性分析，为进一步探索MGPGM的生物学功能奠定基础。【方法】通过PCR扩增MG的pgm全基因序列（MGpgm），连接表达载体pET-28a （+）并进行原核表达及纯化，获得重组MGPGM （rMGPGM）蛋白；制备抗rMGPGM兔血清，提取MG菌的全菌蛋白、膜蛋白以及胞浆蛋白，与抗rMGPGM兔血清进行Western blot反应，分析其在MG菌中的亚细胞定位情况；抗rMGPGM兔血清与MG菌进行悬浮免疫荧光分析，测定PGM在MG的膜表面定位情况；用MG Rlow感染阳性鸡血清与rMGPGM蛋白进行Western blot反应，分析其免疫原性。【结果】在大肠杆菌BL21中成功表达rMGPGM蛋白，制备的兔抗rMGPGM血清抗体效价为102400，Western blot 显示抗rMGPGM的兔血清能与MG全菌蛋白、膜蛋白以及胞浆蛋白反应，且MGPGM不仅在胞浆中大量分布，也少量分布在膜蛋白组分中；悬浮免疫荧光试验进一步证实MG的细胞膜表面有PGM蛋白分布；且MG感染血清与rMGPGM蛋白具有显著反应条带，说明rMGPGM具有较好的免疫原性。【结论】文章证实了MGPGM蛋白在MG的膜表面分布，同时还具有较好的免疫原性，为进一步研究MGPGM蛋白在MG致病过程中的作用提供参考。

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