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温州蜜柑萎缩病毒小外壳蛋白基因克隆与原核表达及其抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 武改霞;李婷婷;孙现超;青玲

作者机构：

关键词： 柑橘;温州蜜柑萎缩病毒;小外壳蛋白;原核表达;抗体

期刊名称：园艺学报

ISSN： 0513-353X

年卷期： 2012 年 39 卷 01 期

页码： 64-72

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 用RT-PCR方法,从采自重庆奉节的‘宫本’柑橘的2个样品中扩增出温州蜜柑萎缩病毒(Satsuma dwarf virus,SDV)SDV RNA2的3′末端,长度为975bp,与报道的SDV S-58 3′末端序列同源性分别为98.7%和98.4%。根据获得的序列设计引物,以含有SDV FJ 3′末端序列的质粒为模板,PCR扩增获得大小为654bp的SDV-FJ小外壳蛋白(Small coat protein,CPS)基因产物。构建了CPS与GST融合表达载体PGEX-CPS,在37℃、1.0 mmol·L-1IPTG条件下诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表明成功表达出分子量约为42kD的GST-CP融合蛋白。以表达的融合蛋白为抗原免疫家兔,制备的抗血清的效价为1/12 800。用获得的抗体进行组织印迹分析表明,SDV在柑橘叶柄基部韧皮部维管束区域含量最高。

分类号： S436.66

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