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牛疱疹病毒4型SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 程悦宁;王振军;曹泽昭;王春霞;吴丹妮;李响;张海丽;闫曼平;张竞;关继羽

作者机构：

关键词： 牛疱疹病毒4型;SYBR Green Ⅰ;实时荧光定量PCR;gB蛋白

期刊名称：中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2025 年 12 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 为了建立一种快速、灵敏的牛疱疹病毒4型(bovine herpesvirus 4,BoHV-4)SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测技术,依据BoHV-4的基因组序列,设计与优化引物浓度和退火温度,并以此建立了检测BoHV-4的qPCR方法以及确定方法的灵敏度、特异性及重复性.结果显示,优化后qPCR体系的最佳引物浓度为400 nmol/L,最佳退火温度为60 ℃;标准曲线为y=-3.680x+39.323,R2=0.999 1;该方法的最低检测下限为37.5 copies/μL,可在70 min内完成样本检测;组内重复变异系数(coefficient of variation,Cv)值小于2％;组间重复Cv值小于3％;特异性试验证实,该方法对牛疱疹病毒1型(bovine parainfluenza virus 1,BoHV-1)、牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛副流感病毒 3 型(bovine parainfluenza virus 3,BPIV-3)无交叉反应;采用建立的qPCR和PCR方法对118份牛眼鼻拭子、阴道分泌物拭子、粪拭子、血液等(其中BoHV-4阳性样品25份)样品进行检测,检测结果与临床检测结果相符.本研究建立的BoHV-4 SYBR Green Ⅰ qPCR检测方法具有高灵敏度、强特异性和良好重复性,为牛群健康监测和疾病防控提供了有力工具.

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