数字农科院2.0

转基因棉花MON757转化体特异性PCR检测方法及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 王叶;范金杰;谢家建;彭于发

作者机构：

关键词： 转基因棉花;MON757;定性PCR;定量PCR;纯杂合

期刊名称：农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2016 年 24 卷 06 期

页码： 908-918

收录情况： 北大核心

摘要： 转基因棉花(Gossypium hirsutum)MON757转化体是孟山都公司研发的转cry1Ac基因的抗虫棉,在美国、加拿大、澳大利亚等国被批准种植或允许用作食品饲料原料,但在我国尚未获得批准种植和应用。目前国内外尚没有转基因棉花MON757特异性的纯杂合检测和定量检测方法报道。为了检测我国棉花中MON757转化体的存在情况,本研究以转基因棉花MON757转化体的插入位点基因组序列和外源插入片段/基因组连接区序列为靶标,建立了特异性的MON757转化体纯杂合定性PCR检测方法和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测方法。所建立的MON757转化体纯杂合定性PCR检测方法的检测引物由分别位于MON757外源基因插入位点两侧基因组和外源插入片段上的3条引物组成,能准确地鉴别棉花植株和种子中MON757转化体的纯合、杂合状态。建立的MON757转化体特异性的q RT-PCR检测方法具有良好的可重复性和灵敏度,其检测下限(limit of detection,LOD)为11个拷贝,定量下限(limit of quantitative,LOQ)为44个拷贝。用此方法对2014年湖北省的49份商品棉花种子进行了检测,结果有5份种子样品检测到MON757转化体。采用MON757转化体纯杂合定性PCR检测方法对这5份种子样品各60个单粒分别进行了检测,同时采用q RT-PCR检测方法对这5份种子样品进行定量测定。结果表明,有1份含量在1.5%左右,4份含量超过了20%,两种方法的测定结果基本一致。本研究建立的MON757转化体纯杂合定性PCR检测方法和q RT-PCR检测方法在田间棉花植株和种子中MON757转化体纯杂合状态的测定以及混合样品中MON757转化体含量的测定方面都具有重要的应用价值。

分类号： S562

  • 相关文献

[1]转cry1Aa基因抗虫棉整合结构解析及转化体特异性检测方法的建立. 王叶,谢家建,黄春蒙,彭于发. 2017

[2]转基因玉米双抗12-5转化体特异性PCR方法验证结果分析. 王颢潜,肖芳,杨蕾,缪青梅,张旭冬,张秀杰. 2020

[3]转基因油菜RF1的外源基因插入位点分析与事件特异性检测方法研究. 聂淑晶,武玉花,吴刚,肖玲,卢长明. 2008

[4]多聚酶对转基因产品PCR检测的影响分析. 夏玉平,吴刚,武玉花,张丽,卢长明. 2010

[5]转基因玉米MON88017转化事件特异性定性PCR检测方法及其标准化. 瞿勇,武玉花,吴刚,曹应龙,卢长明. 2010

[6]植酸酶基因定性PCR检测方法及阳性质粒分子的构建. 李俊,刘信,曹应龙,武玉花,厉建萌,吴刚,张丽,卢长明. 2012

[7]转基因耐除草剂玉米MON87419品系特异性定性PCR检测方法的建立. 李凌燕,肖冰,张旭冬,陈子言,王颢潜,张秀杰,陈红,梁晋刚. 2023

[8]转基因玉米MON87419实时荧光PCR定性检测方法的建立. 李凌燕,肖冰,王颢潜,乌兰,邓志峰,陈红,梁晋刚. 2023

[9]抗逆大豆IND-ØØ41Ø-5转化体特异性定性PCR检测方法的建立及其标准化. 肖芳,,李允静,,武玉花,,高鸿飞,,翟杉杉,,吴刚,,梁晋刚. 2023

[10]不同再生水灌溉方式对土壤-辣椒系统中细菌群落多样性及病原菌丰度的影响. 崔丙健,高峰,胡超,李中阳,樊向阳,崔二苹. 2019

[11]异育银鲫养殖环境典型病原微生物检测和细菌群落解析. 崔丙健,高天明,陈琳. 2019

[12]生物炭对非常规水源灌溉下土壤-作物病原菌的影响. 崔二苹,崔丙健,刘源,高峰,樊向阳,李中阳. 2020

[13]利用转录组及iTRAQ技术筛选高油酸油菜抗病相关基因. 张振乾,肖钢,官春云,邬贤梦,熊兴华,李云昌,胡琼,陈社员. 2015

[14]应用抑制性消减杂交技术从枳中筛选根特异表达基因. 姚利晓,何永睿,许兰珍,雷天刚,彭爱红,邹修平,陈善春. 2014

[15]穿山龙薯蓣皂甙次生代谢合成相关新基因的克隆和分析. 苟兴华,何明雄,孙雁霞,王跃华,苟小军. 2010

[16]应用RNA干扰技术对甜菜夜蛾信息素结合蛋白功能的研究. 周耀振,修伟明,董双林. 2009

[17]谷胱甘肽促进牛体外受精胚胎发育的转录组初探. 于学颖,郭芹芹,郝海生,孙尉峻,赵学明,朱化彬,杨凌,杜卫华. 2016

[18]农作物土传病原物高通量定量监测与风险预警. 唐文华,李洪连,马平,张力群,王晓鸣. 2012

[19]水稻MYB转录因子冷胁迫表达谱分析. 张婷,黄立钰,王文生,傅彬英. 2014

[20]一种测定水稻白叶枯菌基因组中插入序列IS1112拷贝数的定量PCR方法. 谢家建,王锡锋,高必达. 2011

作者其他论文 更多>>