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基于酿酒酵母的多片段质粒的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 汤雅萍;程毅;王吐虹;陈佳;高春生;郭利桃;宋志强;唐超;严准;李智敏

作者机构：

关键词： 质粒构建;多片段质粒;酵母同源重组系统

期刊名称：湖南农业大学学报(自然科学版)

ISSN： 1007-1032

年卷期： 2023 年 49 卷 4 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为避免现有的多片段质粒构建技术的弊端,提高多片段质粒构建效率,以构建树干毕赤酵母Agglutinin-like基因的敲除载体为例,利用酿酒酵母活体细胞重组系统,一次性将多个外源DNA片段和线性化质粒重组,形成环状质粒。通过引物设计在相互连接的DNA片段之间引入50bp重叠序列,用PCR扩增DNA片段后,与线性化质粒一起转化酿酒酵母,再用PCR和测序等方法鉴定阳性酵母菌落中质粒的正确性。通过本方法构建的多片段质粒正确率高、耗时短。

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