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猪繁殖与呼吸综合征病毒CH－1a株核蛋白基因在原核系统中的高效表达与初步应用

文献类型： 中文期刊

作者： 周艳君;童光志;童光志;薛强;仇华吉;王去峰;赵永刚;王玫

作者机构：

关键词： 猪;CH-1a株;核蛋白基因;原核系统;应用;PRRSV;繁殖呼吸综合征病毒;基因表达

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2002 年 24 卷 6 期

页码： 401-404

收录情况： CSCD

摘要： 将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH－1a株核蛋白基因克隆至原核表达载体pET30的多克隆位点中，经鉴定后得到重组质粒pET30a-N，将此重组质粒转化到受体菌BL21中，用诱导剂IPTG分别以不同浓度进行诱导，并在不同诱导时间进行采样，经处理后做SDS－PAGE、Western-blot分析，并以此为包被抗原进行ELISA检测，结果发现以终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导，4小时后表达可达到高峰，其大小约为23kD，薄层扫描结果表明庐蛋白表达量约占菌体蛋白总量的32％，该蛋白不仅与PRRSV阳性血清能发生特异性反应，而且可被PRRSV抗N蛋白单抗所识别，证实此大量表达的蛋白为核蛋白。将此表达产物应用ProBond^TM纯化系统进行纯化，其纯度可达到91％，纯化后的蛋白以50μg/孔包被96孔板，检测来自不同地区送检的猪血清，同时以全病毒ELISA为对照，结果发现二者的符合率高达93．3％，而应用该蛋白进行检测其反应更为敏感，且背景低，制备过程简单，这将为今后应用该蛋白作诊断抗原检测PRRSV奠定了基础。

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