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Rab5、Rab7、Rab9、LAMP1蛋白SYBR Green I 荧光定量PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 鲍云;李爽;杨敏;刘义杰;邵圆梦;高飞;李丽薇;童武;李国新;刘长龙;周艳君;姜一峰

作者机构：

关键词： Rab蛋白;早期内体;晚期内体;荧光定量PCR;SYBR Green I

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： Rab蛋白是GTPases的Ras超家族成员之一，是胞内蛋白在各细胞器之间的运输中具有GTP酶活性的分子开关，同时也是细胞内吞和分泌系统中各种细胞器和囊泡的标志性蛋白。本研究建立了快速高效检测Rab5、Rab7、Rab9、LAMP1基因的方法，根据GenBank中Rab5、Rab7、Rab9、LAMP1基因序列设计引物，提取猪肺泡巨噬细胞的总RNA反转录成cDNA，以其为模板分别对4种基因进行扩增，再连接到pcDNA3.1载体上获得重组质粒，以此作为标准品质粒，从而建立SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。实验结果显示：该方法在102～108 copies/μL范围内呈现出良好的线性关系；与常规PCR相比，敏感性提高了10～1000倍；利用该方法检测4种基因，互相无交叉反应；组内和组间变异系数均小于3%，结果表明，Rab5、Rab7、Rab9、LAMP1的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性，可用于Rab5、Rab7、Rab9、LAMP1基因的定量检测，为进一步研究猪病病原微生物在感染过程中的膜泡运输和抗原加工机制提供了准确有效的工具。

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