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固氮粪产碱菌中nif、ntr和gln基因鉴定及nifA克隆

文献类型： 中文期刊

作者： 林敏;尤崇杓

作者机构：

关键词： 固氮粪产碱菌；nif基因；ntr和gln基因；基因文库；nifA克隆

期刊名称：农业生物技术学报

ISSN： 10061304

年卷期： 1995 年 01 期

页码：

摘要： 本工作采用￣３２Ｐ标记的与固氮（ｎｉｆ）和一般氮代谢（ｎｔｒ和ｇｌｎ）系统有关的基因探针，对不同限制性内切酶完全酶解的粪产碱菌Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｆａｅｃａｌｉｓ总ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，证明在粪产碱菌中存在与ｎｉｆＨ、ｎｉｆＤＫ、ｎｉｆＡ、ｎｔｒＡ，ｎｔｒＣ、ｇｌｎＢ、ｇｌｎＤ同源的ＤＮＡ序列。以ＡｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍｂｒａｓｉｌｅｎｓｅＳｐ７ｎｉｆＡＤＮＡ为探针，经三轮杂交筛选、从粪产碱菌的基因文库获得含有ｎｉｆＡ同源片段的阳性克隆ｐＬＡＦ４３５。将含有ｎｉｆＡ同源序列的６．０ｋｂｌⅡ片段分别亚克隆在ｐＬＡ２９１７和ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（ｐＢＳ）载体上，获得亚克隆ｐＬＡＳ６和ｎＢＡＳ６。建立了亚克隆ｐＢＳＡ６中ｎｉｆＡ同源片段的限制性内切酶图谱，利用亚克隆ｐＬＡＳ６的接合转移特性和ｎｉｆＡ突变株功能互补的方法证明，所亚克隆的ＤＮＡ片段具有ｎｉｆＡ功能

分类号： S154.381

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