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单核细胞增生李斯特菌的单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 张海洋;刘爽;戚雪芹;王权;陈兆国;韩先干;蒋蔚

作者机构：

关键词： 单核细胞增生李斯特菌; 单克隆抗体; 多克隆抗体; 双抗体夹心ELISA

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2021 年 51.0 卷 8.0 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 为建立奶制品中单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的快速检测方法,分别制备抗LM的单克隆抗体和家兔多克隆抗体,以方阵滴定法确定最佳单抗包被浓度和多抗工作浓度,从而建立LM的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。结果表明,抗LM的单抗和多抗效价分别为1∶128000和1∶2560000,分别以抗LM单抗和多抗作为捕获抗体与检测抗体；经优化后选择抗LM单克隆抗体稀释至1∶1000、抗LM兔多抗稀释至1∶4000建立ELISA检测方法。结果显示:所建立的双抗体夹心ELISA方法对LM的最低检测限可达到1×10^(5)CFU/mL,与常见的10种食源性病原微生物均无交叉反应,表明该方法的特异性良好。重复性试验结果显示,该方法的批内、批间变异系数均小于10%,表明该方法具有良好的重复性。模拟样品试验结果表明,在牛奶样本中添加LM至细菌浓度为1×10^(0)CFU/mL时,增菌培养10 h后用本方法即可检出阳性；牛奶样本的添加回收试验进一步表明回收率可达70.22%~91.59%,提示本方法可有效用于牛奶样本中LM的检测。综上,利用抗LM的单抗和兔多抗成功建立了双抗体夹心ELISA方法,该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可为牛奶中LM的监测提供技术支撑。

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