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水稻咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶基因的原核表达、抗体制备和应用

文献类型： 中文期刊

作者： 索青青;吴楠;杨慧;李莉;王锡锋

作者机构：

关键词： 咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶; 原核表达; 多克隆抗体; Western blot; 免疫荧光标记

期刊名称：生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2022 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）

摘要： 咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶（caffeoyl coenzyme A-O-methyltransferase,CCoAOMT）在植物木质素生物合成过程中发挥重要作用。目前关于水稻咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶的研究主要集中在基因水平，对其在蛋白水平上的功能研究却相当少。通过PCR扩增技术克隆得到OsCCoAOMT1基因，并成功构建了原核表达载体pET30a（+）-OsCCoAOMT1，转化大肠杆菌，表达出了重组蛋白。蛋白经纯化后，注射新西兰公兔，成功制备了多克隆抗体。Western blot检测表明该抗体能特异性地结合水稻不同组织的该蛋白。利用制备的抗体对水稻茎原生质体进行免疫荧光标记，激光共聚焦显微镜观察发现在Ubi:OsCCoAOMT1-GFP转基因水稻和野生型水稻原生质体里均可标记到该蛋白的信号，且转基因水稻融合蛋白的GFP信号可以与该蛋白抗体的荧光信号共定位，同时结合水稻核质蛋白分离的Western blot检测结果可知OsCCoAOMT1蛋白在主要分布在细胞质中。表明制备的抗体能用于该蛋白的特异性检测，为后续对水稻咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶的功能研究奠定了良好基础。

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