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北美型猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫层析试纸条的研制及初步应用

文献类型： 中文期刊

作者： 李宛生;李敏华;张洪亮;李超;许浒;付军;龚帮俊;郭镇洋;刘建波;彭金美;周国辉;王倩;田志军

作者机构：

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;北美型;N蛋白;免疫层析试纸条

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2022 年 44 卷 8.0 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2021-2022年度） ; ; 科技核心（2021版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为研制一种快速检测北美型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的免疫层析试纸条(ICS),本研究以红色乳胶微球偶联的PRRSV N蛋白单克隆抗体(MAb)1H4为检测抗体,并包被在结合垫上,以MAb 1H4和羊抗鼠IgG为捕获抗体,并分别包被在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,经各反应条件的优化建立了检测PRRSV的乳胶微球ICS。各反应条件优化结果显示,乳胶微球偶联的MAb即检测抗体浓度为1.5 mg/mL,检测线MAb即检测线捕获抗体的浓度为2.0 mg/mL,质控线羊抗鼠IgG即质控线捕获抗体的浓度为1.0 mg/mL。特异性试验结果显示,该方法可特异性检测我国出现的高致病性、NADC30-like、NADC34-like等北美型PRRSV代表株,与欧洲型PRRSV DV疫苗株及猪的其他常见病毒(CSFV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV、PPV)均无交叉反应；敏感性试验结果显示,该方法对系列稀释PRRSV(10^(5.0) TCID_(50)/mL~2.5×10^(2.0) TCID_(50)/mL)的最低检测限为5×10^(2.0) TCID_(50)/mL,对2倍倍比稀释的重组N蛋白(rN,24000 ng/mL~3.75 ng/mL)的最低检测限为15 ng/mL；重复性试验结果显示,同一批次和不同批次试纸条的检测结果均无差异；对不同类型北美型PRRSV株(高致病性株、NADC30-like株、类高致病性株)感染的猪血清检测结果显示,利用该ICS可以从相应猪血清中检测到不同北美型的PRRSV。对采集的108份疑似PRRSV感染的猪肺组织及血清样品分别采用本研究建立的ICS及本研究室建立的PCR方法检测,结果显示,ICS检测的阳性率为37.03%(40/108),PCR检测的阳性率为42.59%(46/108),二者的总体符合率为83.33%。上述结果表明,该方法可以用于我国PRRSV主要流行株及临床样品的检测。本研究首次以同一株MAb分别作为检测抗体和检测线捕获抗体,建立检测PRRSV的乳胶微球ICS,为现地PRRSV流行病学调查及临床快速检测提供了新的技术手段。

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