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猴源天然免疫限制性因子SAMHD1单克隆抗体的制备与鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 杨莘;周艳君;姜一峰;童武;郭亦非;刘飞;童光志

作者机构：

关键词： SAMHD1蛋白;单克隆抗体;广谱反应性

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2014 年 09 期

页码： 921-926

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备具有广谱反应性的SAMHD1单克隆抗体,通过提取Marc-145细胞的总RNA,采用RTPCR将SAMHD1全长编码基因定向克隆至pCold-TF原核表达载体中,成功构建了重组质粒pColdmSAMHD1。重组质粒转化大肠杆菌Rosseta感受态细胞,经IPTG诱导表达并通过纯化获得了可溶性的重组SAMHD1蛋白。以纯化的重组SAMHD1蛋白为抗原,免疫8周龄BALB/c小鼠,通过间接ELISA和5次杂交瘤细胞亚克隆,筛选出1株针对SAMHD1蛋白的单克隆抗体,遂被命名为M2D9。Western-blot分析显示,M2D9能够与SAMHD1真核表达蛋白以及细胞内源性SAMHD1蛋白发生特异性反应,且具有很好的免疫沉淀效价。交叉反应性鉴定结果显示,M2D9抗体能够与人、鼠源细胞内SAMHD1蛋白发生特异反应。本研究成功获得了具有特异性和广谱反应性的猴源SAMHD1单克隆抗体,可用于ELISA检测、Western-blot分析和免疫沉淀试验,为SAMHD1蛋白功能的深入研究奠定了基础。

分类号： S852.4`Q78

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