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非洲猪瘟病毒O174L蛋白的真核表达载体构建及分子特征分析

文献类型： 中文期刊

作者： 沙嘎那日·吉日木图;林晓;沈兆基;郭肖蓉;李奎;贾红;周荣

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;O174L基因;真核表达;分子特征

期刊名称：中国农业科技导报

ISSN： 1008-0864

年卷期： 2024 年 26 卷 04 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为分析非洲猪瘟病毒O174L基因，通过同源重组方式将O174L基因连接至p RK5M-C-2×Strep载体，构建重组质粒，经PCR扩增和测序鉴定正确后，将重组质粒转染至猪小肠上皮细胞系（porcine intestinal columnar epithelial cells,IPEC-J2）中，通过免疫荧光和Western blot检测O174L蛋白的表达情况。PCR及测序结果显示，p RK5M-C-2×Strep-O174L重组质粒构建成功。免疫荧光和Western blot检测结果显示，O174L蛋白能够在IPEC-J2细胞中稳定表达。生物信息学分析结果显示，基于O174L基因和B646L(p72)基因序列构建各分离毒株的2个系统发育树间排列高度相似。来自中国的16株分离株中，O174L基因序列的相似性高达96.76%～100.00%。其中，与中国爆发的其他Ⅱ型分离株相比，China/2018/Anhui XCGQ在O174L蛋白的第67、75及110位氨基酸存在差异，GZ201801在第110位氨基酸存在差异。Ⅰ型分离株SD/DY-I/2021和HeN/ZZ-P1/2021的O174L蛋白的氨基酸序列分别在第13、73、93、95、113和114位上与其他中国Ⅱ型分离株存在差异。O174L蛋白为稳定的亲水蛋白，没有信号肽和跨膜区；其二级结构由α螺旋、β折叠和无规则卷曲组成，三级结构预测结果与二级结构预测相符。以上结果为深入研究ASFV O174L蛋白与宿主间的相互作用和遗传进化提供了基础。

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