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猪繁殖与呼吸综合征病毒环状RNA疫苗的构建及环化条件优化

文献类型： 中文期刊

作者： 陶春豪;黄颖;王振;姜一曈;朱鸿飞;贾红

作者机构：

关键词： circRNA疫苗;制备体系;PRRSV疫苗;体外表达

期刊名称：中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2025 年 5 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 为构建一种环化率高、便捷有效的环状RNA(circRNA)疫苗制备体系,本研究采用基于Ⅰ型内含子的内含子外显子置换(permuted intron exon,PIE)策略,构建了绿色荧光蛋白(EGFP)circRNA,并对体外转录后(IVT)、一次环化后(IVC1)、二次环化后(IVC2)的RNA进行了 circRNA环化率的比较,在对circRNA进行纯化后将构建的cir-cRNA 体系应用于猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),基于PRRSV GP5蛋白构建了 2种circRNA,并进行了体外表达评价.结果显示,IVC1 RNA与IVC2 RNA的EGFP circRNA环化率及蛋白表达效果相近,但均显著优于IVT RNA,纯化后的EGFP circRNA纯度可达74％,使用该制备体系构建的2种PRRSV GP5蛋白circRNA纯度分别为71％与64％,Western blot和间接免疫荧光结果显示2种circRNA均成功表达.结果表明,成功构建了一种操作简便、成本低廉且环化率高的circRNA制备体系,并基于该体系制备了 2种PRRSV GP5蛋白circRNA候选疫苗,可实现高效表达,从而为动物circRNA疫苗开发及PRRSV新型候选疫苗的研制提供了理论依据.

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