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野生型非洲猪瘟病毒多重数字PCR方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 李松达;蒋亚君;庞忠宝;黄颖;翟文竹;朱鸿飞;赵晓民;贾红

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;多重荧光定量PCR;微滴式数字PCR

期刊名称：动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2024 年 45 卷 04 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为建立一种鉴别诊断野生株和基因缺失株非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的方法，针对ASFV的B646L、EP402R、DP96R基因保守序列设计3套引物和探针，优化三重荧光定量PCR体系作为基础建立微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)检测方法，并对方法的特异性、灵敏性及重复性进行评估。结果显示，优化后的多重荧光定量PCR检测方法的标准曲线线性关系良好，对PRRSV、PEDV、PRV、VSV、PCV、RNase-free水、重组质粒标准品进行特异性检测，特异性良好；重复性试验结果显示，变异系数均小于2%;对3种重组质粒的最低检测下限均为102 copies/μL。参照上述多重荧光定量PCR方法优化后的条件，进行多重ddPCR检测方法的建立，并且对该方法进行评价。结果显示，ddPCR检测方法标准曲线的线性关系良好；特异性及重复性良好；最低检测下限B646L为11.6 copies/μL、EP402R为13.3 copies/μL、DP96R为16.9 copies/μL;ddPCR的检测灵敏度比荧光定量PCR有优势。使用建立的多重ddPCR方法对14份P3实验室中的样品进行实验室样品检测，样品检测符合率达到100%。成功建立了能够同时检测用于鉴别野毒株感染与疫苗株的荧光定量PCR和微滴式ddPCR方法。

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