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颗粒溶素的克隆表达及活性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 王晚霞;兰喜;徐向红;居军;柳纪省

作者机构：

关键词： 颗粒溶素;原核表达

期刊名称：基础医学与临床

ISSN： 1001-6325

年卷期： 2010 年 01 期

页码： 83-87

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的克隆人颗粒溶素基因并进行原核表达。方法体外分离并培养外周血单个核细胞,抽提总RNA,RT-PCR扩增人颗粒溶素的基因片段,并将其插入pMD18-T进行测序,鉴定正确后分别将目的基因亚克隆至pET32a(+),构建原核表达质粒pET-GNLY9K和pET-GNLY15K,将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE和Western-blot鉴定融合蛋白的正确性。MTT检测颗粒溶素融合蛋白的生物活性。结果成功构建了原核表达载体pET-GNLY9K和pET-GNLY15K,经诱导在原核表达系统中高效表达了相应分子质量约31和37ku的融合蛋白,重组颗粒溶素融合蛋白能特异地与抗颗粒溶素抗体结合,GNLY9K融合蛋白可以明显抑制A549细胞增殖,而GNLY15K融合蛋白对细胞增殖影响极低。结论利用原核表达体系成功地表达了不同分子质量的颗粒溶素融合蛋白,为颗粒溶素的后续研究奠定了基础。

分类号： Q786

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