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基于CRISPR/Cas9技术的Wip1基因敲除ST细胞的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 车晶晶;徐奎;张秀玲;向光明;王楠;王悦;刘志国;牟玉莲;李奎

作者机构：

关键词： CRISPR/Cas9; Wip1基因; ST细胞; 猪

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2021 年 52.0 卷 10.0 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 旨在采用CRISPR/Cas9编辑系统获得Wip1基因敲除的猪睾丸（swine testis, ST）细胞,为后续在细胞水平上探究Wip1基因对ST细胞增殖、凋亡的影响奠定基础。本研究将实验室已有的靶向Wip1基因第一外显子的两条sgRNA（sgWip1-1和sgWip1-2）分别连接到pX330-GFP和pX330-RFP载体,然后共转染ST细胞（从80～90日龄的猪胚胎睾丸组织中分离出未成熟的支持细胞）。利用流式细胞仪收集红绿双荧光阳性的ST细胞,以用于单克隆细胞挑选。对得到的30个单克隆细胞进行基因型鉴定,并将PCR产物进行T-A克隆。结果显示,有29个单克隆细胞出现了基因片段敲除,Wip1基因的片段敲除效率为96.7%。其中单等位基因片段敲除的有5个,纯合双等位基因片段敲除的有8个,杂合双等位基因片段敲除的有16个。本研究高效地构建了Wip1基因敲除的ST细胞,不仅为后续研究Wip1基因对ST细胞增殖、凋亡的影响提供了细胞模型,也为研究Wip1基因对公猪繁殖性能的影响奠定了基础。

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