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基于猪细小病毒6型VP1蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 欧云文;潘琴;汪洋;代军飞;任绍科;张洋;张杰

作者机构：

关键词： 猪细小病毒6型(PPV6);VP1蛋白;截短表达;ELISA

期刊名称：农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2024 年 32 卷 06 期

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 猪细小病毒6型(Porcine parvovirus type 6, PPV6)是一种新发现的猪细小病毒，可导致猪(Sus scrofa)出现繁殖障碍，严重威胁养猪业健康发展。为建立一种检测PPV6抗体的间接ELISA方法，本研究以PPV6流行毒株高度保守的病毒颗粒蛋白(virion protein, VP1)(348～675 aa)的编码基因为目标片段，构建原核表达载体pET30a-PPV6-VP1，转入大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)感受态细胞，IPTG诱导表达，进行Ni-NTA树脂亲和层析纯化，获得具有良好的反应原性的重组VP1蛋白，大小约为40 k D。基于纯化的重组VP1蛋白建立间接ELISA抗体检测方法，优化出最佳抗原包被浓度为1 ng/μL，待检血清最佳稀释比例为1∶100,HRP-兔抗猪IgG稀释比例为1∶60 000，阳性临界值OD450>0.62。该间接ELISA检测方法与猪蓝耳病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、古典猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus, PRV)、日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV2)、PPV1阳性猪血清均不发生交叉反应，敏感度达1∶3 200，批内变异系数和批间变异系数均<10%，与病毒中和试验(virus neutralization test, VNT)结果呈正相关，与Western blot结果的阳性符合率为96.6%，表明该间接ELISA检测方法拥有良好的特异性、敏感性、重复性和符合率。采用建立的间接ELISA方法对2018～2022年中国西部地区部分省份收集的452份猪血清进行检测，结果显示样品阳性率为5.31%，表明该病在我国西部地区存在不同程度的感染。本研究成功截短表达了PPV6 VP1(348～675 aa)蛋白，建立了特异性强、灵敏度高、重复性好和符合率高的PPV6间接ELISA方法，为PPV6的血清学调查和检测试剂盒的开发提供了材料。

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