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基于单个B细胞抗体基因扩增技术筛选马IgG1单克隆抗体

文献类型： 中文期刊

作者： 陈阳;刘彤;张佳琦;廖化新;林跃智;王晓钧;王亚玉

作者机构：

关键词： 马IgG;单个B细胞PCR;抗体筛选技术;单克隆抗体

期刊名称：中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2022 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版）

摘要： 在马的免疫学研究领域中，由于目前市场上缺乏商业化的马IgG单克隆抗体，使得对马的B淋巴细胞的研究受到了很大的阻碍，IgG是B细胞受体（BCR）的重要构成成分，与B细胞分化成熟相关。为了获得马IgG特异性的单克隆抗体，利用单个B淋巴细胞扩增技术进行抗体的筛选。首先，将马IgG蛋白（EqIgG1-C）密码子优化后合成在真核表达载体pcDNA3.4上，纯化出抗原蛋白。随后，使用蛋白免疫小鼠，分离脾细胞后利用流式细胞术分离特异性单个B淋巴细胞，扩增出抗体重链和轻链的可变区基因，并用overlapping PCR的方法扩增出线性化的完整抗体，并进行鉴定。结果从80个B细胞中获得了27株特异性重组单克隆抗体，并挑选出3株线性结合活性最强的抗体基因构建到表达载体上，共转染Expi293FTM细胞后表达纯化，经过ELISA和western blot验证，显示获得的抗体可以和EqIgG1-C蛋白有良好的结合作用。使用该方法可以省时高效的获得了特异性抗体，为马的免疫学研究提供了重要研究工具，为鼠单克隆抗体筛选提供了技术拓展。

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