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牛布鲁氏菌LPS-iELISA检测方法的建立及性能评价

文献类型： 中文期刊

作者： 贾沅铮;万兆丰;冷楠楠;吴修肄;连丽燕;蒋蔚;王海东;苗晋锋;尹革芬;黎明;宋小凯;韩先干

作者机构：

关键词： 布鲁氏菌;间接酶联免疫吸附试验(iELISA);虎红平板凝集试验(RBPT);试剂盒比较

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 布鲁氏菌病严重危害畜牧业和公共卫生，亟需高效准确的血清学检测方法。脂多糖（LPS）是布鲁氏菌关键抗原，但基于LPS建立的间接酶联免疫吸附试验（iELISA）在牛布鲁氏菌病诊断中的优化及应用评估尚待完善。建立一种基于布鲁氏菌LPS的牛布鲁氏菌iELISA检测方法，评估其性能并与商品化试剂盒比较。采用热酚法提取猪布鲁氏菌S2株LPS，通过SDS-PAGE、Western blot（WB）和银染验证纯度与免疫原性。通过方阵滴定优化包被浓度（1–8 μg/mL）、血清稀释度（1:10–1:320）、包被条件（缓冲液、时间）、封闭液（明胶/脱脂奶/BSA）、二抗品牌（J/B/S）及孵育时间等参数。以90份阴性血清确定临界值(OD450均值+3SD)。通过特异性（交叉反应）、敏感性（抗体稀释度）、重复性（批内/批间变异系数）试验验证方法可靠性，并使用虎红平板凝集试验（RBPT）、商品化iELISA和cELISA试剂盒对65份临床阳性血清和130份临床阴性血清检测来对比结果的一致性。LPS经WB和银染证实具备典型多糖条带（图1）。最佳条件为：LPS包被浓度2 μg/mL、血清稀释度1:20、PBS缓冲液4℃包被12 h、0.5% BSA封闭、J品牌二抗（1:2 000）孵育60 min，临界值0.292。该方法特异性良好，但与大肠杆菌O157:H7等菌株存在交叉反；敏感性达1:10240稀释；批内变异系数<10%，批间变异系数＜12%。符合率结果显示：与商品化iELISA和cELISA试剂盒对195份临床血清（65份阳性，130份阴性）的检测符合率均达97.4%（Kappa值分别为0.941和0.942），与RBPT的符合率为68.2%（Kappa值=0.02）。本研究建立的LPS-iELISA方法灵敏度高、重复性好，与主流商品化试剂盒一致性优异，为牛布鲁氏菌病诊断提供了可靠技术支撑。

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