禽呼肠孤病毒变异株σC蛋白的原核表达及其抗体ELISA检测方法的建立
文献类型: 中文期刊
作者: 武子华;牛世奇;马天馨;王晨阳;潘晟辉;苑纯秀;滕巧泱;李泽君;刘芹防
作者机构:
关键词: ARV变异株;σC蛋白;原核表达;ELISA
期刊名称:中国动物传染病学报
ISSN: 1674-6422
年卷期: 2023 年
页码:
收录情况: 北大核心(2020版) ; ; 科技核心(2023版) ; ; 农林核心(2020版)
摘要: 为建立禽呼肠孤病毒(ARV)变异株σC蛋白的抗体间接ELISA检测方法,本研究通过RT-PCR扩增了ARV变异株G4的σC蛋白基因,将其构建至原核表达pET28a(+)载体,经IPTG诱导表达和SDS-PAGE、Western Blotting验证。结果显示,大肠杆菌BL21能够可溶性表达G4-σC蛋白,通过切胶回收对诱导表达的σC蛋白进行纯化,回收的σC蛋白纯净且具有良好抗原性,将其作为包被抗原建立了变异ARV血清抗体的间接ELISA检测方法。检测结果表明,蛋白包被浓度7.81 ng/mL,最佳包被条件 37℃孵育2 h后4℃过夜;血清1600倍稀释最佳反应时间1.5 h;酶标二抗最佳稀释度1:2000,最佳反应时间1 h;阴阳性临界值为0.487;批内变异系数1.52%-6.75%,批间变异系数8.13%-9.50%,说明包被的ELISA板稳定且可重复;血清稀释6400倍检测为阳性,敏感性良好,并且经检测该方法具有良好的特异性和实用性,与试剂盒阳性符合率达91.07%。成功建立的ARV变异株ELISA检测方法为变异ARV的疾病诊断及疫苗研发提供了工具与支持。
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