数字农科院2.0

基于CRISPR/Cas9技术的全基因组基因编辑MDCK细胞文库的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 朱媛媛;许榜丰;闫鸣昊;刘芹防;滕巧泱;苑纯秀;李雪松;李泽君

作者机构：

关键词： CRISPR/Cas9;MDCK细胞系;全基因组;基因编辑

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2022 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）

摘要： 本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，首先靶向犬全基因组设计合成转录sgRNA的DNA文库，并将DNA文库全部克隆于lentiCRISPR V2慢病毒转移载体上，高通量测序结果显示文库覆盖度高、均一性良好。将质粒文库和慢病毒包装系统质粒共转染293T细胞，收取含慢病毒样病毒的上清感染MDCK细胞，在最适嘌呤霉素筛选下，收集嘌呤霉素抗性细胞，冻存于-80℃，提取一部分细胞的基因组，通过PCR扩增转录sgRNA的DNA，将PCR产物插入到T载体后，挑取单克隆菌落，测序表明细胞文库中转录的sgRNA具有较好的覆盖度。本实验成功构建了犬全基因组范围转录sgRNA的质粒文库，并成功构建了MDCK细胞全基因组范围的基因编辑细胞库，该文库可作为后续筛选病毒复制关键宿主因子的细胞平台。

分类号：

  • 相关文献

[1]敲除RIG-I基因流感病毒高产MDCK细胞系的建立及功能研究. 曾为俊,许曼,王辉,鲁国涛,邵玉乐,陈洪岩,刘建华,孟庆文. 2019

[2]基因编辑技术在人参中的应用展望. 王琪,张浩,王博文,雷秀娟,王英平. 2020

[3]CRISPR/Cas9技术及其在猪基因编辑中的应用. 刘思远,卢丹,唐中林. 2020

[4]除草剂抗性农作物育种研究进展. 李燕敏,祁显涛,刘昌林,刘方,谢传晓. 2017

[5]利用CRISPR/Cas9技术缺失MDV分离株meq基因的研究. 张峰,于正浩,兰兴鸽,张艳萍,王永强,高立,高玉龙,李凯,祁小乐,崔红玉,潘青,王笑梅,刘长军. 2019

[6]CRISPR/Cas9技术编辑淀粉合成基因PUL. 奉宝兵,魏祥进,焦桂爱,胡时开,邬亚文,谢黎虹,圣忠华,邵高能,唐绍清. 2019

[7]利用CRISPR/Cas9系统定向改良水稻粒长和穗粒数性状. 沈兰,李健,付亚萍,王俊杰,华宇峰,焦晓真,严长杰,王克剑. 2017

[8]CRISPR/Cas9系统构建的水稻OsPht基因突变体材料可用于养分转运评价. 韩娇,王莉,何蕊,李伟,王冰,黄升财,孙永伟,程宪国. 2017

[9]利用CRISPR/Cas9技术对燕麦乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)基因的编辑. 于东洋,王凤梧,融晓萍,武志娟,王鑫,杨燕,韩冰,田青松. 2019

[10]CRISPR/Cas9系统介导基因组编辑的研究进展. 刘志国. 2014

[11]基因编辑技术研究进展及其在苜蓿等豆科饲草作物中的应用. 刘欢,孟颖颖,牛丽芳,林浩. 2017

[12]利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建TLR3敲除小鼠模型. 王伟,姜雪婷,庞中兵,孙海阳,陈洪岩,孟庆文. 2015

[13]利用CRISPR/Cas9技术创制糯稻种质. 陈峰,姜艳芳,焦晓真,张华,朱文银,姜明松,徐建第. 2023

[14]定向敲除SD1基因提高水稻的抗倒性和稻瘟病抗性. 李刚,高清松,李伟,张雯霞,王健,程保山,王迪,高浩,徐卫军,陈红旗,纪剑辉. 2023

[15]不同Cas9启动子对大豆CRISPR/Cas9系统效率的作用分析. 牛志远,秦超,刘军,王海泽,李宏宇. 2023

[16]基因编辑技术在药用植物微生物领域中的研究与应用. 丁冠中,梁池嘉,穆朋,张悦,金桥,刘政波,张淋淋,关一鸣,王岩,刘宁. 2024

[17]稳定表达人、马Tetherin蛋白的MDCK细胞系的构建及其限制流感病毒活性的研究. 王美月,张振宇,王晓钧. 2018

[18]稳定表达跨膜丝氨酸蛋白酶2基因的MDCK细胞系的建立. 吕让,王丹,宋彩玲,齐宾宾,刘明. 2014

[19]稳定表达流感病毒PR8 HA蛋白MDCK细胞系的建立及鉴定. 黄海碧,滕巧泱,王朝霞,戴晓光,张树梅,张旭,申之义,李泽君. 2010

[20]稳定表达流感病毒PR8HA蛋白MDCK细胞系的建立及鉴定. 黄海碧,滕巧泱,王朝霞,戴晓光,张树梅,张旭,申之义,李泽君. 2010

作者其他论文 更多>>