文献类型： 中文期刊
作者： 石照蓉;陈建飞;张洪玲;时洪艳;郭龙军;冯力
作者机构：
关键词： 猪德尔塔冠状病毒;IL-8;转录;M蛋白
期刊名称：中国预防兽医学报
ISSN： 1008-0589
年卷期： 2022 年 4 期
页码：
收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）
摘要： 为研究猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)感染能否诱导宿主细胞产生IL-8,本研究将PDCoV分别感染猪小肠上皮细胞(IPEC)和ST细胞,感染后6h、12h和24h收集细胞,通过荧光定量PCR方法检测IL-8 mRNA转录水平.构建表达PDCoV M蛋白的真核表达质粒pCAGGS-M,经测序鉴定无误后转染HEK 293T细胞,采用间接免疫荧光试验(IFA)和western blot方法检测PDCoV M蛋白的表达.将pCAGGS-M质粒转染IPEC细胞,采用荧光定量PCR方法检测PDCoV M蛋白对IL-8转录的影响.为进一步评价PDCoV M蛋白对IL-8转录水平的影响,将不同浓度pCAGGS-M质粒(10 ng、100ng和200ng)、IL-8启动子质粒和pRL-TK质粒共转染HEK 293T细胞,采用双荧光素酶活性分析试验评价PDCoV M蛋白对IL-8转录活性的影响.荧光定量PCR结果显示,与未感染组相比,PDCoV感染能够显著上调细胞中IL-8 mRNA转录水平,其中PDCoV感染IPEC细胞6 h、12 h和24 h后IL-8 mRNA分别上调3倍、37倍和173倍;PDCoV感染ST细胞6 h、12 h和24 h后IL-8 mRNA分别上调20倍、19000倍和48 000倍.IFA和western blot结果显示PDCoV M蛋白正确表达,与空载体质粒转染组相比,转染表达PDCoV M蛋白的质粒能够上调IPEC细胞IL-8转录水平约4.3倍.双荧光素酶活性分析试验结果显示,与对照组相比,转染10ng、100ng和200 ng pCAGGS-M质粒能够分别诱导细胞中IL-8转录活性上调1.9倍、3.8倍和5.7倍;表明PDCoV M蛋白能够上调宿主细胞IL-8的转录活性.综上所述,PDCoV感染能够显著上调IPEC和ST细胞中IL-8的转录水平,其中PDCoV M蛋白参与诱导细胞IL-8的产生,本研究为深入了解PDCoV致病机制提供参考依据.
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