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全局调控因子FNR对产肠毒素大肠杆菌生物学特性影响的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 杨延;毛曌;江丰伟;李干武

作者机构：

期刊名称：中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2022 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）

摘要： 为研究全局调控因子富马酸盐和硝酸盐减少调控蛋白（FNR）对产肠毒素大肠杆菌（ETEC）生物学特 性的影响，本研究通过Red 同源重组方法构建了ETEC MD724-020 菌株fnr 基因的缺失株Δfnr 及回补株Δfnr （pfnr），分别将ETEC野生株（WT）、Δfnr 以及Δfnr（pfnr）同时接种于TSB液体培养基培养，测定fnr 基因缺失前后 ETEC的生长曲线，结果显示，与野生株相比，缺失fnr 基因后其生长速率无明显变化。将3株菌分别接种于TSB 固体培养基，通过测定游走直径比较分析野生株、缺失株和回补株的运动性，结果显示，与野生株相比，缺失 株Δfnr 的运动能力显著降低（P<0.05）。采用结晶紫法检测3株菌生物被膜（BF）形成能力，结果显示，相比WT和 Δfnr（pfnr）株，缺失株Δfnr BF形成能力极显著下降（P<0.001）。将3株菌分别于含10%绵羊血的TSA平板上划线培 养，进行溶血性试验，结果显示，相比WT和Δfnr（pfnr）株，Δfnr 株溶血圈较野生株显著缩小。将3株菌分别与猪 小肠上皮细胞IPEC-J2互作2 h后，通过平板计数法分析各菌株对该细胞的黏附能力，结果显示，与野生株相 比，缺失株Δfnr 对IPEC-J2细胞的黏附能力显著减弱（P<0.05）。提取上述互作后未黏附细菌的RNA，通过荧光定 量PCR检测fnr 基因缺失后对致病性ETEC相关毒力基因转录水平的影响，结果显示，与野生株相比， Δfnr 株中 eaeH、eltA 和hlyA 基因的转录水平均极显著下降（P<0.001）。本研究首次对全局调控因子FNR影响ETEC的运动 性、溶血性、BF形成能力等生物学特性进行了研究，为进一步开展ETEC致病机理的研究提供了参考依据。

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