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灵芝漆酶在黑曲霉中的重组表达及发酵条件优化

文献类型： 中文期刊

作者： 孙英霞;张铁鹰;安静;郑梦莉

作者机构：

关键词： 漆酶;黑曲霉;异源表达;发酵条件

期刊名称：中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2022 年 11.0 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; 科技核心（2021版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 【目的】在黑曲霉（A.niger）中重组表达灵芝L菌漆酶基因,并对其发酵条件进行优化,旨在获得一株高产灵芝漆酶的黑曲霉基因工程菌。【方法】从灵芝L菌克隆漆酶基因Lac-L,并根据黑曲霉密码子偏好性进行优化。选用黑曲霉糖化酶启动子（PglaA）、信号肽及终止子为表达原件,以米曲霉pyrG基因为筛选标记,构建漆酶表达盒,采用聚乙二醇-CaCl2法将其转化至黑曲霉X1 （ΔpyrG）原生质体中。对转化子进行PCR验证及固态发酵酶活测定,筛选高产漆酶重组菌株,并对阳性转化子固态发酵培养基碳源、无机与有机氮源比例、Cu2+浓度及发酵时间进行优化。【结果】经尿嘧啶缺陷及含2,2′-联氮-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2′-azinobis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid ammonium salt）,ABTS）培养基筛选获得25株重组漆酶转化子,酶活复筛获得灵芝漆酶异源表达6号重组菌株,发酵72 h酶活可达3 532.6 U/kg,宿主菌株的酶活仅为58.37 U/kg。重组6号菌优化后的最适固态发酵条件为:以麸皮为基础培养基,添加2%麦芽糖、2%（NH4）2SO4、0.25 g/L CuSO4,发酵60 h时重组菌株产漆酶活力最高,达到6 255.47 U/kg。【结论】在黑曲霉中成功实现灵芝L菌漆酶基因Lac-L的异源表达。

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