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非洲猪瘟病毒p30蛋白表达与单克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 孟鑫;李松楠;王安铖;闫婉婉;李俊波;陈玲超;童武;孔宁;单同领;于海;童光志;邢明伟;郑浩

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟;p30蛋白;单克隆抗体;原核表达;真核表达

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为了制备非洲猪瘟病毒（ASFV）p30蛋白的特异性单克隆抗体，本研究将p30分别克隆到真核和原核表达载体中，构建了重组的pcDNA3.1-p30以及pColdI-p30质粒。将重组质粒pColdI-p30转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中，经诱导和纯化，获得p30蛋白。随后，将其免疫小鼠，通过细胞融合、筛选、亚克隆获得一株阳性的杂交瘤细胞，命名为5E15。通过间接ELISA，Western blot以及间接免疫荧光鉴定其特异性。结果显示单抗5E15识别真核和原核表达的p30重组蛋白。重组质粒pcDNA3.1-p30用于转染293T细胞，免疫荧光可观察到细胞膜上的特异性绿色荧光。本研究通过表达，纯化获得ASFV p30重组蛋白。并成功制备了一株抗p30的单克隆抗体，为p30蛋白功能研究，非洲猪瘟诊断研究提供了重要材料。

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