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抗口蹄疫病毒单链抗体cDNA T7噬菌体展示文库的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 张晓霞;马军武;周广青;代鹏;林密;冯霞

作者机构：

关键词： 口蹄疫;单链抗体;T7噬菌体展示

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2013 年 03 期

页码： 247-251

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为构建抗口蹄疫病毒单链抗体cDNA T7噬菌体展示文库,利用Trizol试剂提取BALB/c鼠脾B淋巴细胞RNA,采用RT-PCR两步法扩增BALB/c鼠重链可变区和轻链可变区基因,用重叠延伸PCR技术构建抗口蹄疫病毒scFv基因库;在scFv cDNA双链末端加上EcoRⅠ/HindⅢ接头,用内切酶EcoRⅠ和HindⅢ消化接头,形成的双链cDNA两端分别带有EcoRⅠ和HindⅢ黏性末端;将其与含EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7Select 10-3b载体连接,经体外包装,BLT5403菌株增殖,文库扩增,进行体外亲和筛选。所构建的文库库容量的原始浓度为1×107 PFU/mL,扩增后文库浓度为9.6×1013 PFU/mL。随机挑取50个噬菌斑进行PCR鉴定,均为阳性,大小约800bp。经测序,序列完全正确。结果表明,成功构建了抗口蹄疫病毒单链抗体cDNA T7噬菌体展示文库。

分类号： S852.659.6

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