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乙型脑炎病毒基因组cDNA克隆在宿主菌中不稳定因子的初步研究

文献类型： 中文期刊

作者： 郑旭晨;郑浩;郭亦非;刘飞;梁超;童武;单同领;于海;童光志

作者机构：

关键词： 乙型脑炎病毒;遗传不稳定性;潜在启动子;毒性蛋白编码序列位置

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2014 年 04 期

页码： 17-22

摘要： 为了探求乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因组cDNA克隆在宿主菌中不稳定遗传的影响因子,本研究以猪源JEV HEN0701株基因组片段1~2913 bp为研究对象,分析基因组原核启动子和相关毒力基因在不稳定遗传中的作用。在5'端,分析片段中潜在的原核启动子序列,通过PCR扩增得到不同长度的cDNA片段;在3'端,通过内切酶酶切截断基因组prM蛋白或E蛋白编码区,获得3'末端不同的cDNA片段。将各片段克隆入pCR-BluntII-TOPO载体,转化大肠杆菌,于37℃条件下培养。结果显示,片段73~2913 bp、97~2913 bp、355~2913 bp及1~933 bp、1~1275 bp能够在转化菌中稳定遗传;含有其他片段39~2913 bp、54~2913 bp及1~1800 bp、1~1971 bp的重组细菌不能在37℃条件下生长;片段1~1600 bp虽然能够在转化菌中传代,但是出现不规律突变。以上结果表明:软件所预测各原核启动子片段中,基因组73~118 bp区域与cDNA克隆稳定性有关,且上游的54 bp至73 bp的序列对该区域启动子存在影响;在JEV基因组1275 bp至1600 bp之间可能存在毒性蛋白编码序列。

分类号： S852.65

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